花花公子白小姐透恃:堿性蛋白酶活性測定試劑盒北京索萊寶科技有限公司

金牌供應商

性能參數

產品名稱: 堿性蛋白酶活性測定試劑盒
英文名稱: Alkali Proteinase Assay Kit
產品貨號: BC2300
產品規格: 50管/24樣
產品產地: 北京市通州區馬駒橋聯東U谷85A三
產品商標: Solarbio
價    格: 650元
保存與運輸: 4℃保存或-20℃保存;
現貨狀態: 現貨
產品資料: 實驗方法技術資料
更新時間: 2019/9/11 8:35:00
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使用范圍:僅限科研使用,不能應用于臨床
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北京索萊寶科技有限公司
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產品詳細描述

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產品內容

提取液:液體35mL×1瓶,4保存。

試劑:粉劑×1瓶,4保存。臨用前加10 mL蒸餾水溶解。

試劑:粉劑×1瓶,4避光保存。臨用前加入10 mL提取液,沸水浴中磁力攪拌溶解。

試劑液體50ml×1瓶, 4保存。

試劑:液體10mL×1瓶,4保存。

標準品:液體1mL×1支,0.25 μ mol/mL標準酪氨酸溶液,4保存。

產品說明

AKP是指在堿性條件下催化蛋白質肽鍵水解的酶類,屬于絲氨酸蛋白酶。此外,該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵,具有轉酯及轉肽的功能。該酶是主要工業用酶之一,廣泛應用于制藥、絲綢、食品、制革等行業。

堿性條件下,AKP水解酪蛋白生成酪氨酸;堿性條件下,酪氨酸還原***鉬酸生成鎢藍;鎢藍在680nm有特征吸收峰,測定680nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。

試驗所需自備儀器和樣品

研缽、臺式離心機、可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1.5 mL EP管、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/font>

稱約0.1g組織,加入1mL提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃離心10min,取上清,即粗酶液,置冰上待測。或直接稱取0.1g酶制品,加入1mL提取液,置冰上待測。

二、測定:

1.分光光度計預熱30min以上,調節波長到680 nm,蒸餾水調零。

2.試劑、試劑和試劑置于30水浴保溫30min以上。

3.樣本測定(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑)

試劑名稱(μL

對照管

測定管

空白管

標準管

粗酶液

100

100

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

試劑二

 

200

混勻后40℃水浴保溫10min

試劑一

 

200

試劑二

200

 

混勻后10000rpm 4℃離心10min,取上清

上清

200

200

 

 

蒸餾水

 

 

200

 

標準品

 

 

 

200

試劑三

1000

1000

1000

1000

試劑四

200

200

200

200

混勻后40℃水浴保溫20min

 

1mL1mL玻璃比色皿中,在680nm測定光吸收,分別記為A對照管、A測定管、A空白管、A標準管。

三、堿性蛋白酶活性計算:

1)按蛋白濃度計算

NP活性單位U定義:30℃每毫克蛋白每分鐘水解產生mol酪氨酸。

NP活性(U/mg prot

=C標準品×A測定管-A對照管÷A標準管-A空白管)×V1÷Cpr×V2÷T

=0.125×A測定管-A對照管÷A標準管-A空白管)÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

AP活性單位(U)定義:30每克樣品每分鐘催化水解產生1 μ mol酪氨酸。

AP活性(U/g

=C標準品×A測定管-A對照管÷A標準管-A空白管)×V1÷W×V2÷V3÷T

=0.125×A測定管-A對照管÷A標準管-A空白管)÷W

C標準品:0.25 μ mol/mL標準酪氨酸溶液; Cpr:粗酶液蛋白質濃度(mg/mL);W:樣品質量(g);V1酶促反應總體積mL),0.5mL;V2加入反應體系中粗酶液體積(mL),0.1 mL;V3粗酶液總體積(mL),1mL;T:催化反應時間(min),10min。

注意:若反應較弱,A測定管-A對照管差值較小,可適當延長反應時間(20-30min),即第一步水浴時間,最后計算酶活時對公式進行修改。

 

 

 

 

 

 

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